培養(yǎng)基+必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)+適合的溫度+適合的pH模擬體內(nèi)環(huán)境是最常見(jiàn)的細(xì)胞體外培養(yǎng)方式，促使細(xì)胞在體外的環(huán)境中正常生長(zhǎng)增值。
事實(shí)上細(xì)胞在體內(nèi)真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境十分復(fù)雜，許多細(xì)胞在體外平面培養(yǎng)表面會(huì)逐步變得更加扁平，分裂異常，并喪失其分化表型。
如何規(guī)避常規(guī)2D培養(yǎng)帶來(lái)的細(xì)胞異常風(fēng)險(xiǎn)？
2022年了，該懂點(diǎn)3D細(xì)胞培養(yǎng)了！
3D培養(yǎng)是什么？
3D細(xì)胞培養(yǎng)是一種在人工創(chuàng)造的環(huán)境中生物細(xì)胞可以在所有三維空間中生長(zhǎng)的技術(shù)，使細(xì)胞能夠在載體的三維立體空間結(jié)構(gòu)中遷移、生長(zhǎng)，構(gòu)成三維的細(xì)胞載體復(fù)合物，3D細(xì)胞培養(yǎng)允許細(xì)胞在體外向各個(gè)方向生長(zhǎng)，類(lèi)似于它們?cè)隗w內(nèi)的生長(zhǎng)方式。
3D培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)
? 在體外模擬復(fù)雜的組織結(jié)構(gòu)和體內(nèi)形態(tài)，接近體內(nèi)正常細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境
? 展示分化等細(xì)胞活動(dòng)和細(xì)胞間反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)真實(shí)的細(xì)胞生物學(xué)和功能
? 準(zhǔn)確建立靶組織模型，有效預(yù)測(cè)病程和藥物反應(yīng)
? 使用少量細(xì)胞數(shù)，實(shí)現(xiàn)快速生長(zhǎng)，兼容自動(dòng)化儀器，降低成本
3D培養(yǎng)助手——NEST細(xì)胞小室
細(xì)胞小室在3D細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中是強(qiáng)有力的工具，適用于共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲以及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)。
細(xì)胞小室作為通透性支持物可以有效改善極性細(xì)胞的培養(yǎng)，允許細(xì)胞從其基底面和頂面分泌和吸收分子，從而以更為自然的方式進(jìn)行代謝，大程度的模擬體內(nèi)環(huán)境以培養(yǎng)某些特殊的細(xì)胞系。
NEST細(xì)胞小室?guī)椭爿p松建立起“生理上的細(xì)胞-細(xì)胞與細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)”相互作用，模擬天然組織的特異性！
NEST細(xì)胞小室的優(yōu)勢(shì)
? 全規(guī)格孔徑：小至0.4μm，大到8μm，能夠滿(mǎn)足大多數(shù)較大細(xì)胞（如多數(shù)腫瘤細(xì)胞）穿膜的需求。
? 創(chuàng)新的邊緣設(shè)計(jì)：便于輕松加樣。
? PC膜：低吸附率，減少小分子蛋白和其他化合物的損失
? PET膜：透明度佳，具有更好的光學(xué)清晰度，方便觀察細(xì)胞狀態(tài)
? 與大部分固定與染色時(shí)用的溶劑相容
3D培養(yǎng)Transwell實(shí)驗(yàn)細(xì)胞小室使用五大問(wèn)
Q：使用過(guò)程中細(xì)胞為什么不轉(zhuǎn)移？
A：很可能是上室混有高濃度血清或者是小室孔徑不對(duì)。
Q：細(xì)胞小室培養(yǎng)后的細(xì)胞染色時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分布不均一？
A：可能有以下3種原因：1. 小室是否平衡放置于孔板中2.細(xì)胞懸液加入時(shí)是否局部過(guò)多，在使用過(guò)程中細(xì)胞懸液要混勻，建議滴加3.小室是否有傾斜或晃動(dòng)
Q：復(fù)孔間為何差距較大？
A：計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確或加入多個(gè)小室時(shí)細(xì)胞發(fā)生沉降現(xiàn)象，使用中每加一個(gè)小室后建議重新混勻。
Q：遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞為何未能遷移至基底室？
A：可能有以下2種原因：1.選擇的膜孔徑偏小。在使用前需選擇合適孔徑的膜。2.小室下面的氣泡會(huì)妨礙細(xì)胞遷移，導(dǎo)致局部無(wú)細(xì)胞遷移。可以先放入小室，再先加培養(yǎng)基，避免氣泡產(chǎn)生。
Q：遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組和測(cè)試組之間沒(méi)有差別
A：可能有以下2種原因：1.使用的膜孔徑大小不合適，太大或太小都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞很容易遷過(guò)去或者很難遷移。2.小室膜的上層擦拭不充分。一些實(shí)驗(yàn)只需要觀察基底面的細(xì)胞，但是兩面的細(xì)胞會(huì)被染上色并檢測(cè)到，所以要擦去上層。
